小鼠胚胎成纤维细胞

Mouse embryonic fibroblasts

（可贴壁，Cat# LV-MEF001）

(仅用于科学研究)

该说明书方法适用于本公司小鼠胚胎成纤维细胞，您使用时，请按随货的说明书操作，如有任何疑问可咨询公司技术人员。

I 简介

本公司小鼠胚胎成纤维细胞分离自SPF级小鼠，取12-14天胎鼠，采用酶消化分离并进一步纯化所得。细胞来源清晰、活力高、纯度高（>90%），性价比高，可广泛应用于基础生命科学研究以及药物研发中。公司可个性化定制原代细胞，满足不同客户的需求。

II  试剂与材料

-冻存小鼠胚胎成纤维细胞（Cat# LV- MEF001）         

-成纤维细胞培养基（DMEM or RPMI-1640，10%FBS，1%PS）

-胰酶

-PBS

-生物安全柜

-冷冻水平离心机（带水平转子）           

-37℃/5%CO₂培养箱

-移液枪                                        

-恒温水浴锅（38℃预热）  

-75%酒精   

-一次性移液管

-宽口移液枪头（普通移液枪头剪去尖头，再灭菌使用） 

III 细胞的复苏与铺板

1.        将成纤维细胞培养基放入38℃恒温水浴锅中充分预热。

2.        将冻存的成纤维细胞从冷藏位置迅速转移至38℃恒温水浴锅中。尽可能多的浸入38℃水中，顺时针水平摇动，但必须确保冻存管管盖保持在水面以上。

3.        解冻冻存管约90-120s，至冻存管中只有少量碎冰漂浮即可。

4.        300×g，4℃离心5min，去上清并用成纤维细胞培养基重悬。

5.        沉淀的细胞用成纤维细胞培养基重悬并定容至4ml，用台盼蓝排除法测定细胞的活力和细胞总量。

6.        将细胞以4×10⁴cells/cm²的密度接种至培养皿中，摇匀，在37℃/5%CO₂培养箱中培养，24h后换液，之后隔天换液。

IV 胚胎成纤维细胞培养与传代

1.        细胞融合度达到80%时可进行传代。

2.        提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦

拭后再放入生物安全柜中。

3.        吸除旧培养液，加少量PBS润洗细胞，加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察。

4.        待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜成纤维细胞培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用，用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液（控制吹打的力度，避免产生大量的气泡）。

5.        300×g，4℃离心5min，去上清并用成纤维细胞培养基重悬。

6.        按体积比1：3或者1：4传代，将细胞悬液接种到新的细胞瓶内，置37℃/5%CO₂培养箱培养，隔天观察贴壁生长情况。

V 关于售后

如您发现有产品任何质量问题，请您收集原始数据，请第一时间联系公司销售或者技术支持，公司安排人员保证售后。每个实验室条件不同，操作人员习惯不同，熟练程度不一样，实验失败存在客观因素。如未严格按照说明书操作、超过售后时限，公司不做售后，请老师理解与支持。

售后有效期与提供的原始数据：

复苏问题：复苏24小时以内；提供台盼蓝染色或者PI染色。

污染问题：复苏96小时以内；提供相差显微镜照片。

纯度问题：一个月内；提供免疫荧光或者流式结果。

VI 联系电话

公司电话：0755-28284050

公司销售：18129812531（邓经理）

技术支持：19902901483（周博士）